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蔓荆子提取物的有用因素研究及其含量测定


http://www.plant-extract.com.cn2015-10-13 11:29:26

 

  蔓荆子为常用中药材,中国药典收载蔓荆子商品为马鞭草科植物单叶蔓荆Vitex trifolia L.var.simplicifolia Cham.或三叶蔓荆V.trifolia L.的干燥成熟果实。单叶蔓荆漫衍广,产量大,在我国首要漫衍在山东、江西一带。蔓荆子作为中药,具有涣散风热、清利头目标功能[1]。今朝,很多植物提取厂家都在出产蔓荆子提取物,但他们都是以牡荆素(Vitexin)为有用因素指标在出产,产物也是以牡荆素为指标在向客户贩卖,我们颠末对蔓荆子提取物的研究发明,真正起首要浸染的是蔓荆子黄素,基础就没有牡荆素的因素。我们对蔓荆子提取物举办了疏散和测定,并从中疏散出来了蔓荆子黄素,并对其举办含量测定,功效很好,对蔓荆子提取物的出产节制有靠得住依据。检测技术

  一、蔓荆子黄素的疏散检测技术

  1、仪器、试剂与提取物

  1、1仪器 X4型显微熔点测定仪,温度计未校正。HITACHI-200型紫外光谱仪。Shimadzu-400型红外光谱仪。FX-90Q AM-300核磁共振仪,HP 5989A色-质联用仪。

  1、2 试剂 层析用硅胶为青岛海洋化工产物,Sephodex LH-20凝胶树脂,石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇均为说明纯

  1、3 提取物 蔓荆子提取物为本身出产产物

  2、蔓荆子提取物的疏散判断

  Me OH

  max

  取蔓荆子提取物1kg,用95%乙醇消融,滤过,滤液接纳乙醇并浓缩成稠膏,拌入硅胶,干燥后上硅胶柱层析,以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,别离网络,按照薄层点板定性搜查,取蔓荆子黄素部门,再上凝胶树脂,用氯仿-甲醇(1:1)洗脱,结晶疏散,得两个化合物,一个为黄色细针状结晶,一个为黄色结晶。

  黄色结晶,mp189~190℃,盐酸-镁粉回响阳性,UVλ mn;256,273(sh),372;加三氯化铝-盐酸263,280(sh),371;加醋酸钠257,275,350(10min后不削弱);加醋酸钠-硼酸255,270,352。MSm/z;374(M+,100),359,355,331,316,301,285,273,257,245,217,187,173,164,151,135,135,121,93,69,53,43。1HNMRδppm:

  3.73,3.80,3.87,3.92(s,OCH3×4),6.87(1H,s,8-H),7.1(1H,d,J=9.2H z,5’-H),7.5(1H,dd,J=9.2,3.0Hz,6’-H),7.6(1H,d,J=3.0Hz,2’-H),按照以上化学性子及光谱数据,判断为蔓荆子黄素。

  黄色细针状结晶,mp242~243℃(含水甲醇重结晶,文献值236~238℃),盐酸-

  MeOH

  max

  镁粉回响阳性,UVλ nm;260,273(sh),351;加甲醇钠270,404;加三氯化铝276,295(sh),405;加三氯化铝-盐酸268,280(sh),296(sh),372,400(sh);加醋酸钠265,402(10min后不削弱),加醋酸钠-硼酸264,376。MS m/z;360(M+,100),345,341,319,302,299,274,259,245,231,217,203,181,166,153,137,121,109,97,81,69,55,43。1HNMRδppm:3.37,3.80,3.92(s,OCH3×3),6.68(1H,s,8-H),6.92(1H,d,J=8.5H z,5’-H),7.49(1H,dd,J=8.5,2.0Hz,6’-H),7.6(1H,d,J=2.0Hz,2’-H),9.36,9.79,12.64(s)各一羟基上生动氢,重水互换后消散。按照以上化学性子及光谱数据,判断为3,6,7-三甲基槲皮万寿菊素[2]。

  二、蔓荆子黄素的含量测定

  2、仪器与试剂

  2、1仪器美国热电TSP高效液相色谱仪,7725i自动进样器,AG135十万分子一电子天平

  2、2试剂甲醇、磷酸均为说明纯,水为双重蒸馏水,比较品蔓荆子黄素廉价,经HPLC说明,纯度为99.58%,蔓荆子提取物本身出产。

  3、含量测定

  3、1色谱前提:色谱柱C18柱,活动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(60:40),检测波长258NM,流速1.0ml/min,柱温:30℃

  3、2尺度曲线的制备:慎密称取干燥至恒重的蔓荆子黄素比较品1.5mg,置于10ml容量瓶中,甲醇消融定容,作为比较品溶液。慎密汲取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,照上述前提测定,以蔓荆子黄素的峰面积积分值为纵坐标,其浓度为横坐标,绘制尺度曲线,得回归方程:C=2.225×10-7A-4.72×10-4,r=0.9999,其线性范畴在0.015mg/ml—0.075mg/ml。

  3、3样品的测定:慎密称取蔓荆子提取物25mg,置于50ml容量瓶中,加甲醇消融,超声振荡,定容过滤,取续滤液,即为供试品溶液。照上述要领测定,计较含量即得。

  3、4接纳率尝试:慎密称取已知含量的蔓荆子提取物25mg,插手蔓荆子黄素比较品0.75mg,凭证样品测定项下举办处理赏罚,测定,计较接纳率:98.18%,RSD=1.46%。

  3、5慎密度试验:在上述前提下,对统一浓度的比较品溶液持续6次进样,计较峰面积均匀值,RSD为0.945%。

  3、6重现性试验凭证样品测定要领,对统一批号样品举办5次平行试验,蔓荆子黄素含量RSD为1.72%。

  三、小结

  从我们对蔓荆子提取物的疏散判断部门声名,在蔓荆子提取物中基础就没有牡荆素因素,而只有与之功能险些沟通的蔓荆子黄素,同时,我们对蔓荆子提取物举办高效液相说明,也没有牡荆素的因素峰呈现,以是现市场上走的蔓荆子提取物应以蔓荆子黄素为指标,在出产进程中也应以蔓荆子黄素为有用因向来节制蔓荆子提取物的出产,这为往后的蔓荆子出产提供了依据。

  四、参考文献

  [1] 吴永忠,朱良辉等,差异产地蔓荆子化学因素含量较量,中药材,23(10),2000,616~619

  [2] 王坤等,蔓荆子的薄层判断,山东中医杂志,18(2),1999,82~83

 

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